Gibco11131D/11132D用于T細(xì)胞擴增和活化的 Dynabeads™人T活化劑 CD3/CD28

一、產(chǎn)品概述??

Gibco™ Dynabeads™人T活化劑CD3/CD28是一種磁珠偶聯(lián)抗體復(fù)合物，用于高效激活和擴增人T細(xì)胞。該產(chǎn)品通過模擬天然抗原呈遞過程（提供CD3和CD28信號），實現(xiàn)T細(xì)胞的非特異性活化，廣泛應(yīng)用于免疫治療研究（如CAR-T、TCR-T）、腫瘤免疫學(xué)和體外T細(xì)胞功能研究。

二、產(chǎn)品的優(yōu)勢

•無需飼養(yǎng)層細(xì)胞即可活化T細(xì)胞

•活化細(xì)胞仍保留體內(nèi)類似功能

•獲得較大的可重現(xiàn)性，不會受到可溶性抗體或有絲分裂原污染

•實現(xiàn)從100倍到1000倍的T細(xì)胞擴增

三、核心特點??

1.雙信號激活??

磁珠表面共價偶聯(lián)抗CD3（刺激TCR復(fù)合物）和抗CD28（提供共刺激信號），協(xié)同促進T細(xì)胞活化和增殖，避免細(xì)胞凋亡或耐受。

2.高純度與一致性??

均一的4.5μm磁珠，表面抗體比例經(jīng)過優(yōu)化（CD3:CD28 = 1:1），確保批次間穩(wěn)定性。

3.無酶解需求??

無需使用胰蛋白酶或其他酶去除磁珠，減少對細(xì)胞的損傷（傳統(tǒng)方法需磁珠分離）。

4.兼容多種應(yīng)用??

適用于靜止T細(xì)胞、PBMCs或全血中的T細(xì)胞擴增，支持無血清培養(yǎng)基條件。

四、應(yīng)用領(lǐng)域??

•CAR-T/TCR-T細(xì)胞制備??

•腫瘤微環(huán)境研究??

•自身免疫疾病模型??

•疫苗開發(fā)中的T細(xì)胞應(yīng)答評估?

五、質(zhì)量控制??

1.無菌性：通過內(nèi)毒素檢測（<1 EU/mL）和微生物污染測試。

2.性能驗證：每批次經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測，確保≥90%的CD4?/CD8?T細(xì)胞活化（標(biāo)志物如CD25、CD69上調(diào)）。

六、產(chǎn)品規(guī)格

七、產(chǎn)品使用說明

1、實驗前準(zhǔn)備??

（1）、試劑與材料??

??•Dynabeads CD3/CD28（11131D或11132D）

??•T細(xì)胞來源：外周血單個核細(xì)胞（PBMCs）、純化T細(xì)胞或全血

??•培養(yǎng)基：RPMI 1640 + 10% FBS（或無雙抗的X-VIVO 15等無血清培養(yǎng)基）

??•細(xì)胞因子：重組人IL-2（推薦終濃度100–300 IU/mL）

??•輔助試劑：DPBS（無Ca²?/Mg²?）、0.4%臺盼藍（細(xì)胞活性檢測）

??

（2)、 磁珠預(yù)處理??

??•輕柔混勻：取出磁珠瓶，輕搖30秒使磁珠均勻懸浮（勿渦旋）。

??•洗滌（可選）：若需去除保存液，用1mL DPBS重懸磁珠，置于磁力架1分鐘，棄上清，重復(fù)1次后重懸于培養(yǎng)基中。

2、操作步驟??

（1）T細(xì)胞活化（Day 0）??

①.細(xì)胞計數(shù)：分離PBMCs或純化T細(xì)胞（如用CD3/CD28 MicroBeads陰性分選），調(diào)整細(xì)胞密度至1–2×10?/mL。

②.磁珠與細(xì)胞共孵育：

  •比例推薦：

??            常規(guī)活化：磁珠:細(xì)胞= 1:1（如1×10?細(xì)胞+1×10?磁珠）

??            高純度T細(xì)胞：可降至1:0.5??

??            低反應(yīng)性細(xì)胞（如腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞）：可增至1:2~1:3??

         •混合體系：將磁珠與細(xì)胞在培養(yǎng)基中混合，輕柔吹打均勻。

③.培養(yǎng)條件：37°C、5% CO?培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)24–48小時。

④.觀察活化標(biāo)志物：24小時后可檢測CD25/CD69表達（流式細(xì)胞術(shù)）。

（2）T細(xì)胞擴增（Day 2–14）??

      ①.補充IL-2：激活24小時后添加IL-2（終濃度100–300 IU/mL）。

      ②.換液與維持：

    •每2–3天半量換液（離心后棄去一半培養(yǎng)基，補充新鮮含IL-2培養(yǎng)基）。

    •維持細(xì)胞密度在0.5–2×10?/mL（避免過度擁擠）。

     ③.磁珠去除：

    •擴增完成后（通常Day 5–7），將培養(yǎng)物置于磁力架1分鐘，吸出上清中的細(xì)胞，棄去磁珠。

3、關(guān)鍵優(yōu)化參數(shù)??

?（1）磁珠比例：初次實驗建議測試1:1、1:2、1:3比例，選擇擴增效率******者。

?（2）IL-2濃度：過高可能導(dǎo)致Treg細(xì)胞擴增，可嘗試50–500 IU/mL梯度優(yōu)化。

?（3）培養(yǎng)基選擇：無血清培養(yǎng)基（如X-VIVO 15）可減少批次差異，但需預(yù)試細(xì)胞適應(yīng)性。

4、常見問題解答??

Q1: 磁珠是否需要提前包被？??

??否：磁珠已偶聯(lián)CD3/CD28抗體，直接使用即可。

Q2: 如何判斷活化成功？??

??形態(tài)學(xué)：活化后T細(xì)胞體積增大，呈母細(xì)胞化。

??標(biāo)志物檢測：CD25（IL-2Rα）、CD69表達上調(diào)（流式驗證）。

Q3: 磁珠殘留如何處理？??

??磁性分離：重復(fù)磁力架吸附2–3次可去除99%以上磁珠。

5、注意事項??

•無菌操作：全程在超凈臺中進行，避免污染。

•避免凍融：磁珠保存于2–8°C，不可冷凍或離心。

•細(xì)胞活性監(jiān)測：擴增期間每日用臺盼藍檢測活率（應(yīng)≥90%）。

•替代方案：如需符合GMP標(biāo)準(zhǔn)，推薦CTS™ Dynabeads™（貨號A40203）。

6、預(yù)期結(jié)果??

•擴增倍數(shù)：7–14天后T細(xì)胞數(shù)量可增加50–1000倍（取決于起始細(xì)胞類型）。

•表型分析：擴增后的T細(xì)胞以效應(yīng)記憶表型（CD45RO?CD62L?）為主。

八、內(nèi)容與儲存

•Dynabeads™人T活化劑CD3/CD28以懸液的形式提供，由 4×10 ⁷ Dynabeads™/mL的磁珠溶于磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)組成，pH值 7.4，另含0.1%的人血清白蛋白 (HSA)。

•儲存條件：2°C至8°C。切勿冷凍。