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名稱
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品牌
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貨號(hào)
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規(guī)格
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包含
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CryoStor® CS10 細(xì)胞凍存液
CryoStor® CS10 Cell Freezing Medium
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Stemcell
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100-1061
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100mL
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2~8℃
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10%DMSO
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一、產(chǎn)品概述
CryoStor®CS10是一款獨(dú)特配方的無(wú)血清、無(wú)動(dòng)物成分且成分明確的冷凍保存培養(yǎng)基，含有10%二甲基亞砜（DMSO）。該產(chǎn)品專為低溫環(huán)境(-70至-196°C）下的細(xì)胞保存而設(shè)計(jì)，在冷凍、儲(chǔ)存及解凍過(guò)程中為細(xì)胞和組織提供安全保護(hù)環(huán)境。CryoStor®CS10適用于肝細(xì)胞、組織樣本、血液來(lái)源細(xì)胞、CHO細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞系、雜交瘤、人類間充質(zhì)干細(xì)胞、人類胚胎干細(xì)胞（ES）和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）等極度敏感細(xì)胞類型的冷凍保存。
二、產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
1. 開(kāi)蓋即用
2. 不含血清和蛋白
3. 不含動(dòng)物源成份
4. 采用USP級(jí)／最高質(zhì)量組件生產(chǎn)的cGMP
5. 不含內(nèi)毒素
6. 細(xì)胞存活率和復(fù)蘇率高
數(shù)據(jù)圖標(biāo)
圖1. 在CryoStor®CS10中冷凍保存的免疫細(xì)胞解凍后具有穩(wěn)定高存活率
CryoStor®CS10能有效減輕溫度誘導(dǎo)的細(xì)胞分子應(yīng)激反應(yīng)，從而******化多種免疫細(xì)胞（包括T細(xì)胞，數(shù)據(jù)未顯示）和B細(xì)胞解凍后的存活率與回收率。如圖所示，6名不同供體的人B細(xì)胞在CryoStor®CS10中冷凍保存后，經(jīng)碘化丙啶染色檢測(cè)顯示解凍后存活率穩(wěn)定保持高水平（94.3%-97.9%）。
*對(duì)照品低于檢測(cè)限。
圖2. 在CryoStor®CS10中冷凍保存的免疫細(xì)胞解凍后保持功能性
(A) 將冷凍保存在CryoStor®CS10中的人外周血泛T細(xì)胞解凍后，在添加/不添加T細(xì)胞活化因子的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。供體1-3的細(xì)胞在含10%胎牛血清的RPMI培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時(shí)，實(shí)驗(yàn)組添加40 ng/mL PMA和1 μg/mL離子霉素（活化組），對(duì)照組不添加。供體4-5的細(xì)胞在ImmunoCult™-XF T細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基（貨號(hào)#10981）中培養(yǎng)48小時(shí)，實(shí)驗(yàn)組添加ImmunoCult™人CD3/CD28 T細(xì)胞活化劑（貨號(hào)#10971），對(duì)照組不添加。收集培養(yǎng)上清液后，使用人IL-2 ELISA試劑盒（貨號(hào)#02006）測(cè)定分泌的細(xì)胞因子濃度。無(wú)論是PMA/離子霉素還是ImmunoCult™人CD3/CD28 T細(xì)胞活化劑的刺激，均能促使IL-2分泌量較未刺激的對(duì)照組顯著增加。
(B) 將冷凍保存在CryoStor®CS10中的人B細(xì)胞（供體6-11）解凍后，用1 µg/mL CD40和100 ng/mL IL-21刺激培養(yǎng)7天。收集培養(yǎng)上清液，使用人IgG ELISA抗體配對(duì)試劑盒（貨號(hào)#01994）檢測(cè)免疫球蛋白G（IgG）的分泌量。與未刺激的對(duì)照組相比，B細(xì)胞活化顯著提高了IgG的分泌水平。
三、成分說(shuō)明
· 主要冷凍保護(hù)劑：10% DMSO（低毒性，快速滲透細(xì)胞，抑制冰晶生長(zhǎng)）。
· 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：含無(wú)機(jī)鹽、氨基酸及維生素，維持細(xì)胞生理環(huán)境穩(wěn)定。
· 膠體保護(hù)劑：高分子量聚合物（如羥乙基淀粉），提供細(xì)胞外滲透壓支持，減少細(xì)胞皺縮。
· 緩沖系統(tǒng)：HEPES與碳酸氫鹽復(fù)合緩沖，維持pH 7.2-7.4（4℃至-196℃范圍內(nèi)穩(wěn)定）。
四、適用細(xì)胞類型
· 干細(xì)胞：胚胎干細(xì)胞（ESC）、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSC）、間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）、造血干細(xì)胞（HSC）等。
· 原代細(xì)胞：成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞、免疫細(xì)胞（如T細(xì)胞、NK細(xì)胞）。
· 敏感細(xì)胞系：CHO、HEK293、雜交瘤細(xì)胞等。
五、操作與使用說(shuō)明
（1）冷凍保存細(xì)胞
1. 打開(kāi)前，用70%乙醇或異丙醇擦拭CryoStor®CS10容器的外部。
2. 使用細(xì)胞特異性方案獲得細(xì)胞懸液，并離心細(xì)胞以獲得細(xì)胞沉淀。
3. 用移液管小心地移除上清液，留下少量培養(yǎng)基以確保細(xì)胞沉淀不受干擾。輕輕甩動(dòng)試管，使細(xì)胞沉淀重新懸浮。
4. 加入低溫（2-8°C）CryoStor®CS10，充分混合，然后將懸液轉(zhuǎn)移至冷凍管中。
5. 將細(xì)胞在2-8°C下孵育10分鐘。
6. 使用標(biāo)準(zhǔn)慢速速率控制冷卻方案（約-1°C/分鐘）或異丙醇冷凍容器對(duì)細(xì)胞進(jìn)行冷凍保存，并在液氮溫度（-135°C）下儲(chǔ)存。
注：不建議在-80°C下長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
（2）解凍細(xì)胞
1. 在37°C水浴中選擇溫?zé)峤橘|(zhì)。
2. 用70%乙醇或異丙醇擦拭細(xì)胞瓶外壁。
3. 在生物安全柜中，將蓋子旋轉(zhuǎn)四分之一圈以釋放內(nèi)部壓力，然后重新擰緊。
4. 將細(xì)胞瓶輕輕搖晃，快速置于37°C水浴中解凍，切勿將細(xì)胞瓶浸入水中。當(dāng)僅殘留少量冷凍細(xì)胞沉淀時(shí)取出細(xì)胞瓶。切勿渦旋細(xì)胞。
5. 用70%乙醇或異丙醇擦拭瓶外壁。
6. 用溫?zé)岬呐囵B(yǎng)基將細(xì)胞按1：1稀釋。
7. 在室溫（15-25°C）下以300 x g離心細(xì)胞懸液10分鐘。
8. 用移液管小心地移除上清液，留下少量培養(yǎng)基以確保細(xì)胞沉淀不受干擾。輕輕甩動(dòng)試管，使細(xì)胞沉淀重新懸浮。
9. 輕輕向試管中加入培養(yǎng)基。
六、儲(chǔ)存與穩(wěn)定性
· 儲(chǔ)存條件：2-8℃避光保存，未開(kāi)封產(chǎn)品保質(zhì)期24個(gè)月；開(kāi)封后建議2周內(nèi)使用完畢，避免反復(fù)凍融。
· 運(yùn)輸條件：冰袋運(yùn)輸（2-8℃），避免極端溫度波動(dòng)。
七、注意事項(xiàng)
· 操作時(shí)需佩戴手套及護(hù)目鏡，避免DMSO直接接觸皮膚或黏膜。
· 產(chǎn)品不含抗生素，建議在無(wú)菌環(huán)境下操作，確保細(xì)胞無(wú)污染。
· 不同細(xì)胞類型******凍存濃度可能存在差異，建議通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化條件。
八、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)
· 無(wú)菌性：通過(guò)0.22μm濾膜過(guò)濾除菌，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體及內(nèi)毒素（<0.1 EU/mL）。
· 細(xì)胞活性驗(yàn)證：人骨髓MSC復(fù)蘇率≥85%，連續(xù)傳代3次后仍保持多向分化潛能（成脂、成骨、成軟骨分化陽(yáng)性）。
· 批次一致性：每批次進(jìn)行pH、滲透壓（280-320 mOsm/kg）及無(wú)菌性檢測(cè)，確保性能穩(wěn)定。
九、安全信息
· 本產(chǎn)品僅供科研使用，不可用于臨床診斷或治療。
· 廢棄物處理需遵循當(dāng)?shù)厣锇踩ㄒ?guī)，DMSO廢液需分類收集處理。
（注：具體操作細(xì)節(jié)及批次信息請(qǐng)以產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)及質(zhì)檢報(bào)告為準(zhǔn)。）
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