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產(chǎn)品名稱
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ECM內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基/ECM Endothelial Cell Medium
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品牌
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Sciencell
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貨號(hào)
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1001
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規(guī)格
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500mL（基礎(chǔ)培養(yǎng)基）
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25mL FBS（貨號(hào) #0025）
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5mL 內(nèi)皮細(xì)胞生長補(bǔ)充劑（ECGS，貨號(hào) #1052）
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5mL 青霉素/鏈霉素溶液（P/S，貨號(hào) #0503）
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存儲(chǔ)
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將基礎(chǔ)培養(yǎng)基儲(chǔ)存在4°C，將ECGS、FBS和P/S溶液儲(chǔ)存在-20°C,避光。
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航運(yùn)
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基礎(chǔ)培養(yǎng)基：室溫。補(bǔ)充劑：干冰。
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一、產(chǎn)品概述
內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基（ECM）與內(nèi)皮細(xì)胞生長補(bǔ)充劑（ECGS，Cat #1052）和25ml胎牛血清（FBS）一起使用時(shí)，是一種完整的培養(yǎng)基，設(shè)計(jì)用于體外正常內(nèi)皮細(xì)胞的******生長。它是一種無菌液體培養(yǎng)基，含有必需和非必需氨基酸、維生素、有機(jī)和無機(jī)化合物、激素、生長因子、微量礦物質(zhì)和低濃度的胎牛血清（5%）。該培養(yǎng)基由HEPES和碳酸氫鹽緩沖，在氣氛為5%CO2/95%空氣的培養(yǎng)箱中平衡時(shí)，pH值為7.4。該培養(yǎng)基的配制（定量和定性）可提供******平衡的營養(yǎng)環(huán)境，選擇性地支持正常內(nèi)皮細(xì)胞在體外的生長。
二、產(chǎn)品組成
ECM培養(yǎng)基為即用型完全培養(yǎng)基，主要組成成分包括：
1.基礎(chǔ)培養(yǎng)基：采用特殊配方的基礎(chǔ)培養(yǎng)液，為細(xì)胞提供基本的碳源、氮源、維生素、礦物質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)。
2.胎牛血清（FBS）：添加經(jīng)過嚴(yán)格篩選和質(zhì)量控制的胎牛血清（終濃度通常為5-10%），提供細(xì)胞生長所需的天然生長因子、激素、脂質(zhì)和黏附蛋白等。
3.內(nèi)皮細(xì)胞生長添加物（ECGS）：包含特定的重組蛋白生長因子（如VEGF、EGF、bFGF等）、激素（如氫化可的松）以及其他促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖和維持其表型的關(guān)鍵成分。
4.抗生素：通常添加青霉素（Penicillin）和鏈霉素（Streptomycin）混合液，以預(yù)防細(xì)菌污染，保障細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的無菌性。
三、產(chǎn)品特性與優(yōu)勢(shì)
1.高特異性：針對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的代謝特點(diǎn)和生長需求量身定制，顯著提高內(nèi)皮細(xì)胞的貼壁率、增殖速度和傳代能力，優(yōu)于通用型培養(yǎng)基。
2.功能維持：有效維持內(nèi)皮細(xì)胞的典型形態(tài)特征（如鋪路石樣外觀）和生物學(xué)功能，如血管形成能力、吞噬功能及對(duì)血管活性物質(zhì)的反應(yīng)性。
3.質(zhì)量保障：所有原材料均經(jīng)過嚴(yán)格篩選和質(zhì)量檢測(cè)，生產(chǎn)過程遵循標(biāo)準(zhǔn)化操作流程，確保每批次產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定、性能一致。
4.使用便捷：即開即用的完全培養(yǎng)基形式，無需用戶自行配制和添加復(fù)雜成分，簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)操作步驟，節(jié)省時(shí)間并減少實(shí)驗(yàn)誤差。
5.低批次差異：通過嚴(yán)格的質(zhì)量控制體系，******限度降低不同批次產(chǎn)品間的性能差異，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性。
四、適用細(xì)胞類型
適用于多種來源的原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)，包括但不限于：
· 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）
· 人微血管內(nèi)皮細(xì)胞（HMEC）
· 人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞（HAEC）
· 小鼠/大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞
· 其他組織來源的大血管或微血管內(nèi)皮細(xì)胞
五、儲(chǔ)存與運(yùn)輸條件
1.儲(chǔ)存條件：收到產(chǎn)品后，應(yīng)立即置于2-8°C避光保存，請(qǐng)勿冷凍。
2.保質(zhì)期：在規(guī)定儲(chǔ)存條件下，自生產(chǎn)日期起保質(zhì)期通常為6個(gè)月，請(qǐng)?jiān)诒Ｙ|(zhì)期內(nèi)使用，逾期禁止使用。
3.運(yùn)輸條件：采用冰袋低溫運(yùn)輸，確保運(yùn)輸過程中溫度維持在2-8°C，收到后請(qǐng)及時(shí)檢查包裝及產(chǎn)品狀態(tài)。
六、產(chǎn)品的使用說明
（1）使用前準(zhǔn)備
1.復(fù)溫：若培養(yǎng)基為冷凍儲(chǔ)存，使用前需將其從-20℃冰箱取出，置于2-8℃冰箱中緩慢解凍，或在室溫下自然解凍，避免使用微波爐等快速加熱方式，以防破壞培養(yǎng)基成分。
2.混勻：解凍后的培養(yǎng)基需輕輕顛倒混勻，使其中的營養(yǎng)成分和添加物均勻分布，避免劇烈振蕩產(chǎn)生氣泡。
3.預(yù)熱：在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)操作前，將所需量的培養(yǎng)基置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中預(yù)熱30分鐘左右，使培養(yǎng)基溫度達(dá)到細(xì)胞培養(yǎng)的適宜溫度。
（2）操作步驟
1.細(xì)胞復(fù)蘇（若適用）：
o 從液氮或-80℃冰箱中取出凍存的內(nèi)皮細(xì)胞，迅速置于37℃水浴鍋中搖晃解凍，直至凍存管內(nèi)僅剩少量冰晶。
o 用75%酒精擦拭凍存管外壁消毒后，在超凈工作臺(tái)內(nèi)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含有適量預(yù)熱ECM培養(yǎng)基的離心管中，輕輕混勻。
o 以1000-1200 rpm的速度離心5-8分鐘，棄去上清液。
o 向離心管中加入適量預(yù)熱的ECM培養(yǎng)基，吹打重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度后接種于培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中，置于37℃、5% CO?的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2.細(xì)胞傳代：
o 當(dāng)培養(yǎng)瓶中的內(nèi)皮細(xì)胞生長至匯合度達(dá)到80%-90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。
o 棄去培養(yǎng)瓶中的舊培養(yǎng)基，用無菌PBS緩沖液洗滌細(xì)胞2-3次，以去除殘留的培養(yǎng)基和血清。
o 加入適量的胰蛋白酶消化液，覆蓋細(xì)胞表面，置于37℃培養(yǎng)箱中孵育2-5分鐘，期間在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化，當(dāng)細(xì)胞變圓、間隙增大時(shí)，立即加入適量預(yù)熱的ECM培養(yǎng)基終止消化。
o 用移液管輕輕吹打培養(yǎng)瓶底部，使細(xì)胞完全脫落并形成單細(xì)胞懸液。
o 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中，以1000-1200 rpm的速度離心5-8分鐘，棄去上清液。
o 加入適量預(yù)熱的ECM培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，根據(jù)需要按一定比例接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充足量ECM培養(yǎng)基后，置于37℃、5% CO?的恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
3.細(xì)胞換液：
o 常規(guī)培養(yǎng)過程中，每隔1-2天更換一次ECM培養(yǎng)基。
o 棄去培養(yǎng)瓶中的舊培養(yǎng)基，用無菌PBS緩沖液輕輕洗滌細(xì)胞1-2次。
o 加入適量預(yù)熱的新鮮ECM培養(yǎng)基，置于37℃、5% CO?的恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
（3）注意事項(xiàng)
1.操作全過程需嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作技術(shù)，避免細(xì)菌、真菌等微生物污染。
2.培養(yǎng)基在使用前應(yīng)檢查是否有渾濁、沉淀、顏色異常等現(xiàn)象，若出現(xiàn)上述情況，禁止使用。
3.避免培養(yǎng)基長時(shí)間暴露于光線直射下，以防某些敏感成分分解失效。
4.不同批次的培養(yǎng)基可能存在輕微差異，建議在使用新批次培養(yǎng)基時(shí)進(jìn)行小范圍細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)試，確認(rèn)其適用性。
5.胰蛋白酶的消化時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)和消化液濃度靈活調(diào)整，避免消化過度損傷細(xì)胞。
6.培養(yǎng)過程中應(yīng)密切觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞生長異常（如形態(tài)改變、貼壁不良、污染等），應(yīng)及時(shí)處理。
7.避免反復(fù)凍融：培養(yǎng)基一經(jīng)解凍，請(qǐng)勿再次冷凍，多次凍融會(huì)導(dǎo)致營養(yǎng)成分失活和沉淀產(chǎn)生。
8.顏色變化觀察：培養(yǎng)基中酚紅指示劑可反映pH變化，正常為橙紅色；若變?yōu)辄S色（偏酸性）或紫色（偏堿性），需及時(shí)檢查培養(yǎng)箱CO?濃度或是否存在污染。
9.血清沉淀處理：低溫儲(chǔ)存可能導(dǎo)致血清中部分蛋白成分析出，若出現(xiàn)輕微沉淀，可在37°C水浴中輕輕搖晃至沉淀溶解，不影響使用；若沉淀嚴(yán)重或培養(yǎng)基渾濁，請(qǐng)勿使用。
10.安全提示：本產(chǎn)品僅供科研使用，不可用于臨床診斷或治療，操作時(shí)請(qǐng)佩戴適當(dāng)?shù)膫€(gè)人防護(hù)裝備（如手套、實(shí)驗(yàn)服、護(hù)目鏡）。
11.細(xì)胞系驗(yàn)證：建議定期對(duì)培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行身份驗(yàn)證（如特異性標(biāo)志物CD31、vWF免疫熒光染色）和污染檢測(cè)（如支原體檢測(cè)）。
（4）常見問題及解決方法
1.細(xì)胞生長緩慢：
o 可能原因：培養(yǎng)基預(yù)熱不充分、培養(yǎng)箱溫度或CO?濃度異常、細(xì)胞接種密度過低、細(xì)胞老化或污染等。
o 解決方法：確保培養(yǎng)基預(yù)熱至37℃；檢查培養(yǎng)箱參數(shù)并校準(zhǔn)；適當(dāng)提高細(xì)胞接種密度；更換新的細(xì)胞種子；若懷疑污染，及時(shí)進(jìn)行無菌檢測(cè)并處理。
2.細(xì)胞形態(tài)異常：
o 可能原因：培養(yǎng)基質(zhì)量問題、消化過度、污染、培養(yǎng)環(huán)境不適等。
o 解決方法：更換新批次的ECM培養(yǎng)基；優(yōu)化胰蛋白酶消化時(shí)間和操作；檢查是否存在微生物污染并清除；確保培養(yǎng)箱內(nèi)溫度、濕度和CO?濃度適宜。
3.培養(yǎng)基出現(xiàn)沉淀：
o 可能原因：儲(chǔ)存溫度不當(dāng)（如反復(fù)凍融、溫度過低）、培養(yǎng)基中某些成分溶解度變化等。
o 解決方法：若沉淀在37℃預(yù)熱后可溶解，且培養(yǎng)基其他性質(zhì)正常，可嘗試?yán)^續(xù)使用；若沉淀無法溶解或培養(yǎng)基出現(xiàn)其他異常，則應(yīng)丟棄該批次培養(yǎng)基。
七、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)
每批次產(chǎn)品均通過以下嚴(yán)格質(zhì)量檢測(cè)：
· 無菌性檢測(cè)：細(xì)菌、真菌、支原體檢測(cè)結(jié)果均為陰性。
· pH值檢測(cè)：在37°C、5% CO?條件下，pH值維持在7.2-7.4范圍內(nèi)。
· 滲透壓檢測(cè)：符合內(nèi)皮細(xì)胞正常生長的滲透壓范圍。
· 細(xì)胞活力檢測(cè)：使用標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁率>90%，連續(xù)傳代5次以上仍保持良好生長狀態(tài)和形態(tài)。
· 內(nèi)毒素檢測(cè)：內(nèi)毒素含量≤0.1 EU/ml。
北京
