一、產(chǎn)品概述
HELIOS 人血小板裂解物-PURE（細胞培養(yǎng)級）是一款經(jīng)過嚴格工藝處理的高質(zhì)量細胞培養(yǎng)添加劑，源自健康人血小板，通過可控的裂解過程釋放血小板中豐富的生長因子、細胞因子、黏附蛋白及其他營養(yǎng)成分。本產(chǎn)品旨在為多種哺乳動物細胞（尤其是間充質(zhì)干細胞、內(nèi)皮細胞、上皮細胞等原代細胞及干細胞）的體外培養(yǎng)提供優(yōu)異的營養(yǎng)支持，有效替代傳統(tǒng)胎牛血清（FBS），降低異種蛋白污染風險，提高細胞培養(yǎng)的安全性和一致性。

二、產(chǎn)品特性
?無動物成分/血清替代品
?用5%的UltraGRO1M-PURE替代高達20%的胎牛血清
?在原代分離和擴增培養(yǎng)中性能更好
?縮短種群倍增時間（20~30小時）
?低成本的低成本選擇產(chǎn)生
?沒有粘附因子需要
?Lot到批次一致性
?不需要肝素

三、產(chǎn)品的性能展示
1.縮短hMSCs的倍增時間和提高增殖能力

圖1：UltraGROTM-PURE對人間充質(zhì)干細胞生長的性能。(A)將UltraGRO“M-PURE培養(yǎng)的人骨髓間充質(zhì)干細胞（hBM-MSCs）與人血小板裂解物供應商a的倍增時間和(B)累積數(shù)量翻倍。兩種培養(yǎng)基補充劑與基礎培養(yǎng)基的濃度為5%。(N=3)
2.保持多譜系分化的潛力

圖2：在UltraGRO-PURE中培養(yǎng)的來自骨髓（BM）、脂肪組織（AD）和臍帶（UC）的人間充質(zhì)干細胞的特征。(A)細胞形態(tài)在5.100倍放大時呈紡錘形形態(tài)。(B)人骨髓間充質(zhì)干細胞隨后可分化為成骨細胞（茜素紅染色），200倍放大；(C)脂肪細胞（油紅O染色），200倍放大；(D)軟骨細胞（阿利新藍染色），100倍放大。
3.用5% UltraGROTM-PURE替代20%胎牛血清

圖3：UltraGROTM-PURE對來自骨髓（BM）、脂肪組織（AD）和臍帶（UC）生長的人間充質(zhì)干細胞的性能。(A)20%定義的胎牛血清培養(yǎng)或(B)UltraGROTM-PURE培養(yǎng)的人間充質(zhì)干細胞5代的平均倍增時間。(C)UltraGROTM-PURE培養(yǎng)的hBM-MSCs、(D) hAD-MSCs和(E)hUC-MSCs的累積數(shù)量加倍與UltraGROTM-Adv相當，作為纖維蛋白原耗盡的hPL產(chǎn)物的參考。(N=3)
4.維持細胞表面表型

圖4：在UltraGROTM-PURE中培養(yǎng)5代的人BM-、AD-和UC-MSC顯示了MSC表面標記物的特征性表達。UltraGROTM-Adv.is作為纖維蛋白原缺失hPL產(chǎn)物的參考。

四、質(zhì)量控制標準
1.外觀：黃色至淺黃色液體
2.總蛋白：4.0 - 8.0 g/dL
3.內(nèi)毒素:≤ 10 EU/mL
4.無菌性：通過
5.支原體：陰性。
6.pH：測試。
7.滲透壓：測試。
8.性能測試：測試和記錄

五、適用范圍
用于人類體外組織和細胞培養(yǎng)加工應用。

六、重要信息
1.不溶性顆粒可能會在解凍的 UltraGRO 中形成™-純正。已發(fā)表的研究表明，顆粒不會改變產(chǎn)品的性能。
2.不溶性顆?？赡軙诮鈨龅?UltraGRO 中形成™-PURE，建議在3,400 xg下離心3~5分鐘。
3.在 UltraGRO 之后過濾完成介質(zhì)（例如 5%）™-PURE在基礎介質(zhì)中稀釋，不會影響UltraGRO™-PURE補充細胞培養(yǎng)性能。然而，0.22微米過濾不推薦用于100% UltraGRO™-純凈濃縮物，因為這可能會減少5%的UltraGRO™-純細胞培養(yǎng)性能。
4.應避免反復的凍融循環(huán)，因為它們會導致不可溶性沉淀物的增加，從而導致 UltraGRO 的潛在減少™-純粹的表演。

七、MSC培養(yǎng)條件
1.媒體：完全培養(yǎng)基由基礎培養(yǎng)基(例如α-MEM或其他支持性培養(yǎng)基)和UltraGRO-PURE組成。
2.培養(yǎng)類型：粘附
3.培養(yǎng)容器：細胞培養(yǎng)板、T型瓶、G-Rex培養(yǎng)瓶、細胞培養(yǎng)袋、旋轉(zhuǎn)瓶或垂直輪式生物反應器溫度范圍：36℃至38℃
4.培養(yǎng)箱環(huán)境：濕度為4~6%的CO加濕環(huán)境，確保培養(yǎng)容器中實現(xiàn)適當?shù)臍怏w交換。

八、使用說明
1. UltraGRO™-PURE在典型的細胞培養(yǎng)介質(zhì)中，即含有2mM L-谷氨酰胺的最終濃縮物的α-MEM中，以5%（v/v）的濃度顯示MSC的******生長。
2. 我們建議將MSCs的接種量控制在每平方厘米約3×103~ 6×103個細胞。
3.UltraGRO™-PURE已經(jīng)被纖維蛋白原耗盡，并且在細胞培養(yǎng)液中不需要添加肝素。

九、準備工作
1.試劑解凍：將HELIOS人血小板裂解物-PURE從-20℃或-80℃冰箱中取出，置于2-8℃冰箱中緩慢解凍（建議過夜解凍），或在室溫下快速解凍（需不斷輕輕混勻）。解凍過程中避免劇烈震蕩。
2.基礎培養(yǎng)基準備：準備適合目標細胞培養(yǎng)的基礎培養(yǎng)基（如DMEM、MEM、α-MEM、RPMI-1640等），并根據(jù)需要添加谷氨酰胺、抗生素（如青霉素/鏈霉素）等常規(guī)添加劑（注意：部分敏感細胞系可能對某些抗生素敏感，需根據(jù)情況調(diào)整）。
3.無菌操作環(huán)境：在超凈工作臺內(nèi)進行所有操作，確保無菌環(huán)境，避免污染。

十、培養(yǎng)基配制步驟
1.確定添加比例：根據(jù)目標細胞類型及培養(yǎng)經(jīng)驗，確定HELIOS人血小板裂解物-PURE在完全培養(yǎng)基中的******添加體積百分比。通常推薦添加比例為5%-15%（v/v），具體比例需用戶根據(jù)細胞特性進行預實驗優(yōu)化（建議設置不同濃度梯度，如5%、10%、15%等，評估細胞增殖、形態(tài)等指標以確定******濃度）。
2.混合均勻：在無菌條件下，將計算好體積的HELIOS人血小板裂解物-PURE緩慢加入到預熱或室溫的基礎培養(yǎng)基中，邊加邊輕輕混勻，避免產(chǎn)生氣泡。
3.分裝與儲存：配制好的完全培養(yǎng)基可分裝保存于2-8℃冰箱中，建議在1-2周內(nèi)使用完畢，以保證其******活性。避免反復凍融完全培養(yǎng)基。

十一、細胞培養(yǎng)操作建議
1.細胞復蘇與接種：按照常規(guī)細胞復蘇方法復蘇凍存細胞，用含HELIOS人血小板裂解物-PURE的完全培養(yǎng)基重懸細胞，調(diào)整細胞密度后接種于培養(yǎng)器皿中，置于37℃、5% CO?的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2.細胞換液：根據(jù)細胞生長情況，通常每2-3天更換一次完全培養(yǎng)基。換液時，棄去舊培養(yǎng)基，用PBS或無血清培養(yǎng)基輕輕洗滌細胞1-2次，然后加入新鮮的含HELIOS人血小板裂解物-PURE的完全培養(yǎng)基。
3.細胞傳代：當細胞生長至匯合度達到70%-90%時進行傳代。棄去舊培養(yǎng)基，用胰蛋白酶或其他合適的消化液消化細胞，終止消化后離心收集細胞，用完全培養(yǎng)基重懸并按適當比例接種到新的培養(yǎng)器皿中。
4.細胞凍存：如需凍存細胞，可使用含HELIOS人血小板裂解物-PURE的凍存液（通常在完全培養(yǎng)基基礎上添加10%-20% DMSO），按常規(guī)凍存程序進行。

十二、常見問題及解決方案
1.細胞增殖緩慢：
•檢查添加比例是否過低，可適當提高HELIOS人血小板裂解物-PURE的濃度。
•確認細胞接種密度是否適宜，調(diào)整接種密度。
•檢查培養(yǎng)箱溫度、CO?濃度、濕度等環(huán)境參數(shù)是否正常。
•排查基礎培養(yǎng)基是否過期或配制不當。
2.細胞形態(tài)異常：
•可能是添加比例過高或細胞對產(chǎn)品不適應，可降低添加比例或嘗試逐步適應法（如從低濃度開始，逐步提高比例）。•檢查是否存在污染，如支原體污染可能導致細胞形態(tài)改變。
•確認解凍過程是否規(guī)范，避免因反復凍融導致產(chǎn)品活性下降。
3.培養(yǎng)基出現(xiàn)沉淀：
可能是由于低溫儲存導致部分蛋白析出，可將培養(yǎng)基置于37℃水浴中輕輕搖晃，觀察沉淀是否溶解。若溶解，通常不影響使用；若沉淀不溶解，可能是產(chǎn)品質(zhì)量問題，建議停止使用。
4.批次間差異：
盡管產(chǎn)品經(jīng)過嚴格質(zhì)量控制，但不同批次間仍可能存在細微差異。建議在更換新批次產(chǎn)品時，進行小范圍預實驗，驗證其適用性。

十三、儲存與運輸
UltraGRO™-PURE在需要之前冷凍儲存最穩(wěn)定。建議儲存溫度為-20°C。濕冷凍UltraGRO™-使用前將產(chǎn)品置于37°C水浴中純凈。一次UltraGRO™-PURE解凍后，建議當天完全使用完成的培養(yǎng)基制備（例如5%），或?qū)⑵浞殖梢淮涡杂昧?，并?20°C下儲存未使用的用量。

十四、參考文獻
1. Scalable Manufacturing of Human Mesenchymal Stromal Cells in the Vertical-Wheel Bioreactor System: An Experimental and Economic Approach.
de Sousa Pinto D, Bandeiras C, de Almeida Fuzeta M, Rodrigues CAV, Jung S, Hashimura Y, Tseng RJ, Milligan W, Lee B, Ferreira FC, Lobato da Silva C, Cabral JMS. Biotechnol J. 2019 Aug;14(8):e1800716. doi: 10.1002/biot.201800716.

2. A fully-closed and automated hollow fiber bioreactor for clinical-grade manufacturing of human mesenchymal stem/stromal cells.
Amanda Mizukami, Mario Soares de Abreu Neto, Francisco Moreira, Ana Fernandes-Platzgummer, Yi-Feng Huang, William Milligan, Joaquim M. S. Cabral, Claudia L. da Silva, Dimas T. Covas, Kamilla Swiech. Stem Cell Rev. 2018;14(1):141-143. doi: 10.1007/ s12015-017-9787-4.

3. Transplantation routes affect the efficacy of human umbilical cord mesenchymal stem cells in a rat GDM model.
Dan Wu, Shan Zou, Haibin Chen, Xiaoyan Li, Yetao Xu, Qing Zuo, Yi Pan, Shi-Wen Jiang, Hung Huang Lizhou Sun. Clin Chim Acta. 2017;475:137-146. doi: 10.1016/j.cca.2017.10.013.

4. Integrated culture platform based on a human platelet lysate supplement for the isolation and scalable manufacturing of umbilical cord matrix-derived mesenchymal stem/stromal cells.
de Soure AM, Fernandes-Platzgummer A, Moreira F, Lilaia C, Liu SH, Ku CP, et al. J Tissue Eng Regen Med; 2017;11(5):1630-1640.

5. Human Platelet Lysate versus Fetal Calf Serum: These Supplements Do Not Select for Different Mesenchymal Stromal Cells.
Eduardo Fernandez-Rebollo, Birgit Mentrup, Regina Ebert, Julia Franzen, Giulio Abagnale, Torsten Sieben, Alina Ostrowska, Per Hoffmann, Pierre-François Roux, Björn Rath, Michele Goodhardt, Jean-Marc Lemaitre, Oliver Bischof, Franz Jakob & Wolfgang Wagner. Sci Rep. 2017 Jul 11;7(1):5132. doi: 10.1038/s41598-017-05207-1.

6. Long-Term Expansion in Platelet Lysate Increases Growth of Peripheral Blood-Derived Endothelial-Colony Forming Cells and Their Growth Factor-Induced Sprouting Capacity.
Tasev D, van Wijhe MH, Weijers EM, van Hinsbergh VWM, Koolwijk P. PLoS One. 2015;10(6):e0129935.

7. Evaluation of human platelet lysate versus fetal bovine serum for culture of mesenchymal stromal cells.
Hemeda H, Giebel B, Wagner W. Cytotherapy. 2014;16(2):170-80.

8. Human platelet lysate is a feasible candidate to replace fetal calf serum as medium supplement for blood vascular and lymphatic endothelial cells.
Cytotherapy. Hofbauer P, Riedl S, Witzeneder K, Hildner F, Wolbank S, Groeger M, et al. 2014;16(9):1238-44.

9. Human Wharton’s Jelly Mesenchymal Stem Cells Plasticity Augments Scar-Free Skin Wound Healing with Hair Growth.
Sabapathy V, Sundaram B, V M S, Mankuzhy P, Kumar S. PLoS One. 2014; 9(4):e93726.

10. The effect of platelet lysate fibrinogen on the functionality of MSCs in immunotherapy.
Copland IB, Garcia MA, Waller EK, Roback JD, Galipeau J. Biomaterials. 2013;34(32) : 7840-50.

11. Human platelet lysate stimulates high-passage and senescent human multipotent mesenchymal stromal cell growth and rejuvenation in vitro.
Griffiths S, Baraniak PR, Copland IB, Nerem RM, McDevitt TC. Cytotherapy. 2013; 15(12):1469-83.

12. Pooled human platelet lysate versus fetal bovine serum-investigating the proliferation rate, chromosome stability and angiogenic potential of human adipose tissue-derived stem cells intended for clinical use.
Trojahn Kølle SF, Oliveri RS, Glovinski PV, Kirchhoff M, Mathiasen AB, Elberg JJ, et al. Cytotherapy. 2013; 15(9):1086-97.

13. Manufacturing mesenchymal stromal cells for phase I clinical trials.
Hanley PJ, Mei Z, da Graca Cabreira-Hansen M, Klis M, Li W, Zhao Y, Durett AG, Zheng X, Wang Y, Gee AP, Horwitz EM. Cytotherapy. 2013;15(4):416-22.

14. Human platelets lysate as a promising growth-stimulating additive for culturing of stem cells and other cell types.
Shanskii YD, Sergeeva NS, Sviridova IK, Kirakozov MS, Kirsanova VA, Akhmedova SA, et al. Bull Exp Biol Med. 2013; 156(1):146-51.

15. Human platelet lysate as a fetal bovine serum substitute improves human adipose-derived stromal cell culture for future cardiac repair applications.
Naaijkens BA, Niessen HW, Prins HJ, Krijnen PA, Kokhuis TJ, de Jong N, et al. Cell Tissue Res. 2012; 348(1):119-30.

16. Platelet lysate from whole blood-derived pooled platelet concentrates and apheresis- derived platelet concentrates for the isolation and expansion of human bone marrow mesenchymal stromal cells: production process, content and identification of active components.
Fekete N, Gadelorge M, Fürst D, Maurer C, Dausend J, Fleury-Cappellesso S, et al. Cytotherapy. 2012; 14(5):540-54.

17. Phenotypical and functional characteristics of mesenchymal stem cells from bone marrow: comparison of culture using different media supplemented with human platelet lysate or fetal bovine serum.
Ben Azouna N, Jenhani F, Regaya Z, Berraeis L, Ben Othman T, Ducrocq E, et al. Stem Cell Research & Therapy. 2012, 3(1):6.

18. Human platelet lysate permits scale-up of dental pulp stromal cells for clinical applications.
Govindasamy V, Ronald VS, Abdullah AN, Ganesan Nathan KR, Aziz ZA, Abdullah M, et al. Cytotherapy. 2011;13(10):1221-33.

19. Alternatives to the use of fetal bovine serum: human platelet lysates as a serum substitute in cell culture media.
Rauch C, Feifel E, Amann EM, Spötl HP, Schennach H, Pfaller W, et al. ALTEX. 2011; 28(4) : 305-16.

20. Influence of Platelet Lysate on the Recovery and Metabolic Performance of Cryopreserved Human Hepatocytes Upon Thawing.
Tolosa L, Bonora-Centelles A, Donato MT, Mirabet V, Pareja E, Negro A, et al. Transplantation. 2011; 91(12):1340-6.

21. Platelet-lysate-Expanded Mesenchymal Stromal Cells as a Salvage Therapy for Severe Resistant Graft-versus-Host Disease in a Pediatric Population.
Lucchini G, Introna M, Dander E, Rovelli A, Balduzzi A, Bonanomi S, et al. Biol Blood Marrow Transplant. 2010; 16(9):1293-301.

22. Generation of mesenchymal stromal cells in the presence of platelet lysate: a phenotypic and functional comparison of umbilical cord blood- and bone marrow-derived progenitors.
Avanzini MA, Bernardo ME, Cometa AM, Perotti C, Zaffaroni N, Novara F, et al. Haematologica. 2009;94(12):1649-60.

23. Treatment of refractory acute GVHD with third-party MSC expanded in platelet lysate-containing medium.
von Bonin M, Stölzel F, Goedecke A, Richter K, Wuschek N, Hölig K, et al. Bone Marrow Transplant. 2009; 43(3):245-51.

24. Platelet lysate stimulates wound repair of HaCaT keratinocytes.
Ranzato E, Patrone M, Mazzucco L, Burlando B. Br J Dermatol. 2008;159(3):537-45.

25. Human platelet lysate allows expansion and clinical grade production of mesenchymal stromal cells from small samples of bone marrow aspirates or marrow ?lter washouts.
Capelli C, Domenghini M, Borleri G, Bellavita P, Poma R, Carobbio A, et al. Bone Marrow Transplant. 2007; 40, 785–791.

26. Platelet lysates promote mesenchymal stem cell expansion: a safety substitute for animal serum in cell-based therapy applications.
Doucet C, Ernou I, Zhang Y, Llense JR, Begot L, Holy X, et al. J Cell Physiol. 2005; 205(2):228-36.