一、產(chǎn)品概述
Gibco® AMNIOMAX™ II 完全羊水培養(yǎng)基（貨號：A5557001）是專為中國市場設(shè)計的即用型、無菌液體培養(yǎng)基，優(yōu)化用于羊水細胞的體外培養(yǎng)與擴增。該產(chǎn)品基于經(jīng)典配方，添加必要的營養(yǎng)成分、生長因子及抗生素，可高效支持羊水細胞（如胎兒成纖維細胞、上皮細胞等）的貼壁生長、增殖與形態(tài)維持，適用于產(chǎn)前診斷中的細胞遺傳學分析（如染色體核型分析）及相關(guān)研究應用。

二、產(chǎn)品組成
主要組成成分為抗生素（慶大霉素），L- 谷氨酰胺和胎牛血清。

三、醫(yī)療器械備案憑證編號
國械備20210210號

四、產(chǎn)品特性與優(yōu)勢
即用型設(shè)計：無需額外添加血清或添加劑，開箱后可直接使用，簡化實驗操作流程，減少人為誤差；
高效細胞支持：優(yōu)化配方促進羊水細胞快速貼壁（通常24-48小時內(nèi)），顯著提高細胞存活率與增殖速率，縮短培養(yǎng)周期；
嚴格質(zhì)量控制：每批次產(chǎn)品均通過無菌性、內(nèi)毒素、pH值、滲透壓及細胞生長促進能力檢測，確保批次間一致性與可靠性；
中國市場專供：符合中國相關(guān)法規(guī)要求，包裝與說明書均適配國內(nèi)使用場景，提供本地化支持。

五、預期用途
僅用于細胞增殖培養(yǎng)，不具備對細胞的選擇、誘導、分化功能，培養(yǎng)后的細胞用于體外診斷。
本產(chǎn)品適用于人羊水細胞與絨毛樣本的原代培養(yǎng)，培養(yǎng)后的細胞用于產(chǎn)前診斷測試。

六、儲存與運輸
–20°C至–5°C 避光儲存，有效期為 18 個月。生產(chǎn)日期及失效日期見標簽。運輸條件：低于–5°C。

七、使用方法
該細胞培養(yǎng)基為冷凍提供，解凍后即可使用?？稍?-8°C溫度下解凍，然后輕輕旋轉(zhuǎn)以確保均勻。請勿在 37°C 溫度下解凍。否則可能形成沉淀，應避免。
注：AmnioMAX™ 培養(yǎng)基含有胎牛血清（FBS）；解凍和儲存后，可能會產(chǎn)生絮狀碎屑。
• 已解凍但未開封的細胞培養(yǎng)基可在標注有效期內(nèi)在 2°C至 8°C的黑暗環(huán)境下保存最多兩個月。
• 開封后，請在 7 到 10 天內(nèi)使用可實現(xiàn) AmnioMAX™ 產(chǎn)品的******生長性能。請避免反復加熱/冷卻或長時間暴露在光線下。
• 請勿在標簽所注有效期外使用。

八、詳細操作流程
（1）開始前準備
1.無菌地將全部內(nèi)容物（15mL）AmnioMAX™-C100補充劑加入到90mLAmnioMAX™-C100基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。
2.輕輕旋轉(zhuǎn)混合物，以確保均勻。
3.避光儲存于2-8°C，直至使用。 不建議對AmnioMAX ™產(chǎn)品進行額外補充，添加Fungizone ™可能具有毒性。

（2）制備羊水樣本用于培養(yǎng)
1.使用20mL注射器或試管采集羊水，該容器已獲得細胞培養(yǎng)批準，然后在室溫下保存樣本直至處理。
2.輕輕翻轉(zhuǎn)羊水樣本的原始容器，使細胞重新懸浮。
3.將樣品轉(zhuǎn)移至錐形管（貨號339651或339653)中，然后在室溫下以100×g離心。
4.在頂部和底部均貼上35mm Nunc™ EasYDish™培養(yǎng)皿（貨號150460)標簽。使用鑷子將無菌Nunc™ Thermanox™蓋玻片（貨號174985)放置于培養(yǎng)皿底部。
5.小心地避免干擾細胞沉淀，從離心機中取出錐形管。在生物安全柜中，從每個試管中移除上清液。保留~1毫升液體位于沉淀上方。
6. 將上清液轉(zhuǎn)移至另一試管中，以保存用于未來的生化檢測。
7.小心地抽吸每個沉淀物上方的任何剩余上清液，然后向每個待接種的培養(yǎng)物的沉淀中加入0.5 mL AmnioMAX™-II完全培養(yǎng)基。
8. 輕輕敲擊試管側(cè)壁以重新混懸沉淀，然后將細胞懸液均等分配到蓋玻片中心。小心地將懸浮液限制在蓋玻片上。
9. 在37°C和5%CO22的濕化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24至48小時。

（3）用AmnioMAX ™ -II完全培養(yǎng)基灌流細胞培養(yǎng)物
1.輕輕向培養(yǎng)皿中加入2mL預熱的AmnioMAX ™-II完全培養(yǎng)基。
2.在37°C和5%CO22的濕化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)兩天。

（4）飼料培養(yǎng)物
1.在培養(yǎng)箱內(nèi)，使用無菌的5 mL血清移液管從培養(yǎng)皿邊緣移除培養(yǎng)基，以避免細胞受到干擾。
2.加入2mL預熱的AmnioMAX ™-II完全培養(yǎng)基，然后將培養(yǎng)物 置于37°C和5%CO2的加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天。

（5）用于中期染色體制備的收獲細胞
1. 培養(yǎng)第5天開始，使用倒置顯微鏡定期檢查菌落形成和細胞生長。每48至72小時更換培養(yǎng)基，直至觀察到菌落。
2.當菌落形成明顯時，向每個2mL蓋玻片培養(yǎng)物中加入50µL的10mg/mL KaryoMAX™科賽霉素™溶液（貨號15210040或貨號15212012)，然后輕輕旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿以混合。
3.在37°C和5%CO22的加濕培養(yǎng)箱中孵育20分鐘。
4.將培養(yǎng)皿從培養(yǎng)箱中取出，然后在培養(yǎng)皿內(nèi)邊緣周圍輕輕加入~1mL低滲溶液（HBSS，貨號14025092或PBS，貨號10010023）。
5.讓培養(yǎng)皿靜置10-12分鐘。從培養(yǎng)皿邊緣吸出低滲溶液/培養(yǎng)基混合液。
6.加入2mL低滲溶液，然后讓培養(yǎng)皿靜置12分鐘。
7.輕輕加入~1 mL新鮮的6：1甲醇/冰醋酸固定液，然后讓培養(yǎng)皿靜置12分鐘。吸去培養(yǎng)皿邊緣周圍的固定液。
8.重復步驟7，使用新鮮的3：1固定液重復2-3次每次10分鐘。
注：請勿去除最終固定劑。
9.用精細鑷子將蓋玻片從培養(yǎng)皿中取出，然后將蓋玻片的邊緣放在紙巾上以排出多余的固定劑。
10.將35毫米培養(yǎng)皿置于濕紙巾表面（為干燥過程創(chuàng)造濕潤環(huán)境），然后將蓋玻片的角落（細胞面朝上）抵住蓋玻片。靜置晾干2-3分鐘。
11.將35毫米培養(yǎng)皿蓋移至60°C的載玻片加熱器上，然后將蓋玻片（細胞面朝上）靠在蓋玻片上。靜置干燥~10分鐘。
12.用革蘭氏染色筆輕輕標記每個蓋玻片的背面，然后將蓋玻片細胞面朝上放置在60°C載玻片加熱器上至少4小時，但不超過24小時。
13.使用標準配方和時間對蓋玻片進行染色。
14.蓋玻片染色并干燥后，分析中期染色體，然后解釋結(jié)果。

（6）用吉姆薩染色劑染色
用酶和染色劑對染色體進行分帶是識別正常和異常染色體結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵。
1.根據(jù)下表制備6個Coplin罐：

2.將載玻片置于含有胰蛋白酶/氯化鈉混合液的罐中（罐1）內(nèi)，放置規(guī)定時間。時間可以短至10秒或長至2分鐘，具體取決于所用胰蛋白酶的活性水平。
3.胰蛋白酶作用時間結(jié)束后，取出載玻片，然后通過依次浸入0.9%氯化鈉沖洗罐（罐2和3）進行沖洗。
4.將載玻片放入含有Gurr染色劑和緩沖液的染色罐（罐4）中，靜置5分鐘。時間可能因所用染色劑的強度不同而有所差異。
5.從罐中取出載玻片，然后依次浸入兩個Gurr緩沖液沖洗罐（罐5和6）中進行沖洗。
6.從最后一次沖洗中取出載玻片，風干，然后用Cytoseal ™ 60覆蓋載玻片。允許在烘箱（50°C）中干燥，之后就可以在顯微鏡下進行中期掃描了。

九、質(zhì)量保證/控制
每批AmnioMAX ™-II完全培養(yǎng)基和AmnioMAX ™-C100完全培養(yǎng)基均需通過美國認證的參考細胞遺傳學實驗室進行性能測試，以確保始終如一的卓越性能。將混合的人羊水原代樣本在AmnioMAX ™-II完全培養(yǎng)基或AmnioMAX ™-C100完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)六天后，方可測量菌落數(shù)和有絲分裂菌落數(shù)。此外，每批產(chǎn)品需檢測pH值和滲透壓，并在批次放行前必須通過無菌測試。